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*新型的檢測方法更實用
更新時間:2022-02-15   點擊次數(shù):627次

*新型的檢測方法更實用


*也稱“金葡菌",隸屬于葡萄球菌屬,是革蘭氏陽性菌代表,為一種常見的食源性致病微生物。該菌適宜生長溫度為37℃,pH為7.4,耐高鹽,可在鹽濃度接近10%的環(huán)境中生長。*常寄生于人和動物的皮膚、鼻腔、咽喉、腸胃、癰、化膿瘡口中,空氣、污水等環(huán)境中也無處不在。

檢測方法

一,傳統(tǒng)分離鑒定方法

世界上對食品中*的檢測通常采用生化鑒定的手段,并在初期采用平板劃線分離。當前我國檢測食品中*依據(jù)國家標準《食品微生物學檢驗 *檢驗》(GB4789.10-2016) [4] 中的方法進行。國家標準執(zhí)行內(nèi)容包括定性檢測和定量檢測兩部分。在無菌條件下接種到肉湯中進行前增菌,將培養(yǎng)物接種劃線,根據(jù)生化鑒定方法進行血清學鑒定。傳統(tǒng)生化鑒定方法操作簡單,穩(wěn)定性強,成本低,是目前常用的鑒定方法。

二,免疫學檢測方法

免疫學檢測方法主要是基于免疫學理論研究,其是通過設計的抗原、抗體和免疫細胞,檢測抗原和抗體的結(jié)合以及免疫細胞分泌的細胞因子的,從而達到檢測目的一種實驗方法。該技術方法主要包括酶聯(lián)免疫法、免疫熒光法、免疫膠體金法等 。

①酶聯(lián)免疫法:其原理是利用抗體與抗原在載體表面的特異性結(jié)合,加入某種酶,酶與抗體或抗原結(jié)合在一起,從而形成可以跟蹤抗體或抗原的標記物,由于抗原或抗體與受檢樣品的反應產(chǎn)生抗原或抗體的復合物,此時加入酶反應顯色底物,產(chǎn)物的量的大小與檢測物質(zhì)的量的大小呈正相關,分析顯色從而確定樣品中待檢測物的含量。目前已經(jīng)開發(fā)了幾種根據(jù) ELISA 技術用于檢測培養(yǎng)上清液和食物樣品 (例如干酪,土豆沙拉,火腿和牛奶)中的* 。

②免疫熒光法:免疫熒光技術利用熒光色素對抗體或抗原進行標記,然后檢測目標抗原或抗體??乖涂贵w特異結(jié)合后,通過考察熒光信號的強弱進行定性定量檢測。與酶介導的免疫測定相比,基于熒光的免疫測定具有提供高通量分析和靈敏度的更大潛力 。

③免疫膠體金法:該方法借助硝酸纖維膜為固定相載體,樣品溶液通過毛細作用在試紙條中移動,在試紙條中同時加入了針對待檢測物質(zhì)特異性的抗原或抗體。與 ELISA 技術相比,免疫膠體金技術操作更為簡單,對實驗人員沒有特別的技術要求,適合基層單位和現(xiàn)場診斷。但是免疫膠體金相比較 ELISA 法而言,靈敏度更低,且使用范圍不廣,需要進一步的研究。總體而言,免疫膠體金有著強大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應用前景 。

三,分子生物學檢測方法

該技術主要包括聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)技術,核酸探針技術,環(huán)介導等溫擴增技術等技術。

①聚合酶鏈反應技術:該方法的原理是在 DNA聚合酶的作用下,游離的脫氧核糖核酸參照堿基互補配對的原則,以模板 DNA為主鏈,通過提供一段引物,迅速的擴增 DNA 的雙螺旋結(jié)構(gòu)。PCR 技術特異性強、敏感度高,已廣泛應用于醫(yī)學、生物學等領域中。PCR 作為致病微生物的檢測方法,穩(wěn)定性強,是目前主流的檢測方法。在微生物檢測應用中,引物的設計以及靶序列的選擇是 PCR 方法的核心。PCR 法同時也有一定的局限性,由于該方法需要對樣品進行增菌,食品成分復雜,會對實驗造成干擾。與其他方法相比,PCR 技術儀器設備價格高,需要花費的成本較高,推廣普及需要一定的時間和資金支持。

②核酸探針技術:通過使用基因特異性核苷酸序列作為探針與目的 DNA 雜交的一種核酸雜交技術,通過檢測該段特異性的標記物,從而判斷是否含有目標微生物。核酸探針具有分子生物學檢測技術的靈敏度高、特異性強的優(yōu)點,但是實驗周期長,操作繁瑣,如果樣品中目標微生物含量過低,極易造成樣品目標微生物未檢出,出現(xiàn)假陰性的實驗結(jié)果。

③環(huán)介導等溫擴增技術:該技術基于 DNA擴增技術,能夠在恒溫條件下,根據(jù)設計的多對引物,利用鏈置換型 DNA 聚合酶快速的進行核酸的擴增。與 PCR 方法比較,環(huán)介導等溫擴增法操作更加快捷簡單,花費成本較低,且對儀器要求低,能夠廣泛利用在食源性致病微生物的檢測中。



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