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信帆生物教您革蘭氏染色的小技巧
更新時間:2020-08-18   點擊次數:698次

信帆生物教您革蘭氏染色的小技巧

 

何為革蘭氏染色
革蘭氏染色是細菌鑒別染色方法中常使用的,染色結果可區(qū)分革蘭氏陽性菌及陰性菌,是鑒定細菌重要的分類依據之一。染色有4種試劑:

初染劑:結晶紫,步驟中先使用的試劑,把細菌染成藍紫色。

媒染劑:革蘭氏碘液,可與初染劑結合,形成結晶紫及碘復合物(CV-I),加強染料顏色的固定。

脫色劑:95%乙醇,因陽性菌與陰性菌細胞壁構造不同,而有不同的脫色反應。

復染劑:番紅,被上述步驟脫色的細菌,就會被這此試劑染成紅色。

 

革蘭氏染色原理:革蘭氏染色法是由丹麥微生物學家漢斯-克理斯蒂安-革蘭(Hans Christian Gram)于1884年發(fā)明,至今仍為鑒別細菌之重要方法。依據革蘭氏染色法可將細菌分為革蘭氏陽性以及革蘭氏陰性兩類。其染色原理推測與此兩類細菌之細胞壁結構有重大關系。說法有二其一為:革蘭氏陰性細菌的細胞壁含脂量高,酒精脫色時會將部份脂質萃取出來,而使細胞壁結構松動,通透性增加,故結晶紫-碘復合體(CV-I)被帶出細菌體外而無色。

革蘭氏陽性細菌的細胞壁幾乎不含脂質,酒精甚至會使細胞壁脫水,故結構更加致密,結晶紫-碘復合體就被留在細菌體內。其二為:酒精處理時,會使細菌的細胞壁肽聚醣(peptidoglycan)空隙縮小。革蘭氏陽性細菌之細胞壁肽聚醣較厚,而革蘭氏陰性細菌較薄,所以造成結晶紫-碘復合體離開革蘭氏陰性細菌的機會較大。故以酒精脫色后,取用紅色的番紅進行復染,此時無色的革蘭氏陰性細菌就會變成粉紅色,而原本已染上藍色的革蘭氏陽性細菌就會變成紫色。革蘭氏

 

染色注意事項:不論何種染色法,基本都要先熟習抹片的制作,抹片應厚薄適中,且宜勻而薄,細菌量不宜太多。染色時,脫色步驟可影響結果正確與否,脫色過度會使初染劑流失,使革蘭氏陽性細菌變?yōu)楦锾m氏陰性細菌的顏色:但脫色不足,則無法*去除CV-I復合物,結果使革蘭氏陰性細菌呈現革蘭氏陽性細菌的顏色。

此步驟非常需要經驗的累積。每種染劑之間,以蒸餾水或無菌水充分清洗,以除去剩余的染液。宜使用18-24小時培養(yǎng)的新鮮菌落,因老化的細菌易失去保留初染劑的能力,而顯示出錯誤的結果,可能部分染成紅色,部分呈紫色。建議每次染色時,可以帶品管玻片一起染色,確定染色時間及步驟正確。

 

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