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信帆生物與您分享明膠酶譜試劑盒實驗小竅門!
更新時間:2019-12-17   點擊次數(shù):682次

信帆生物與您分享明膠酶譜試劑盒實驗小竅門!

    
基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌,活化后能夠降解細胞外基質的膠原蛋白,又稱膠原酶。通過影響細胞外基質,膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組織重塑等過程,并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經(jīng)等許多疾病過程。血漿與組織中的MMP-2、MMP-9參與各種生理與病理過程,其在診斷和治療中的意義日益受到重視。


檢測原理

本試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法,其靈敏度可達1 nM,高于ELISA方法,其基本原理和程序是:制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠,含蛋白酶的樣品在此凝膠中進行電泳,電泳結束后取出凝膠與酶反應Buffer 孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮區(qū)域,從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學反應緩沖液,可檢測少至0.1~0.5μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性,檢測靈敏度~1nM。試劑盒可進行50次標準小膠檢測,如果小膠加樣孔為10~15個,則總計可檢測500~750個樣品。
 

實驗中的小貼士告訴大家:

1.做酶譜要測定樣品蛋白的濃度(同Western blot,建議用BCA法);

2.酶譜法是測定樣品中MMP-2、9活性的,如果煮沸使蛋白變性就沒有用了,故禁忌煮沸;

3.上樣緩沖液中也不能加β-巰基乙醇,這點由western blot轉作明膠酶譜的朋友切記、切記;

4.蛋白上樣量必須保證一樣,不會出現(xiàn)一致的透明條帶,如果不能保證上樣量一致,測出的相對活性也沒有統(tǒng)計分析的意義;

5.上樣時zui重要的一點,必須在4℃環(huán)境中操作,我用的是冰臺,同時所用的蛋白樣品(-80℃冰箱)不能是以前曾解凍使用過的,必須是新取出的,因為只要解凍就會有部分酶降解,影響你的結果。此外做過一次酶譜的蛋白樣品也不要反復使用,下次應使用其它已分裝、未解凍過的樣品;

6.電泳后的步驟很簡單,液體別配錯,照著方法做就可以了。

 

如果你曾做過Western blot,在這里恭喜你了,只要注意幾個小細節(jié),明膠酶譜對你非常簡單。

 

購買我司試劑盒可以提供免費代測服務,客戶準備好樣本,上海和南京地區(qū)的客戶可以提供免費上門取樣服務。其他地區(qū)的客戶,樣本用泡沫箱子包好,放干冰或者冰袋寄送給我們。代測時間為5到7個工作日提供原始數(shù)據(jù),分析數(shù)據(jù), 實驗操作步驟以及實驗所用儀器。

 

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