ATPase 染色液使用方法!
產(chǎn)品說明:
三腺苷酶( adenosine triphosphatase,ATPase)是一種水解酶,是催化 ATP 合成的一種酶。三腺苷酶根據(jù)所用激活劑、抑制劑以及酶定位的不同分為膜性三腺苷酶、肌球蛋白三腺苷酶、線粒體三腺苷酶等。ATPase 能水解三腺苷為腺苷和,此酶只作用于與之間的高能鍵,因而釋放大量能量。
其催化反應(yīng)如下:A-P-P-P + H2O→A-P-P + H3PO4 +能量。
ATPase 染色(鈣鈷法)原理在于三腺苷酶水解三腺苷為二磷腺苷和,根與鈣離子結(jié)合為鈣沉淀,再被置換為鈷,終產(chǎn)物為黑色沉淀。
規(guī)格:5×50ml
保存:4℃,避光,
有效期:6個月
用途:腺苷三酶染色,主要由孵育液、硝酸鈷、硫化銨、陰性對照孵育液等組成。酶活性部位呈棕黑色或黑色。
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操作步驟:
1. 冰凍切片直接入蒸餾水。
2. 一張切片入堿性預(yù)孵育液室溫孵育 15min。另一張切片入酸性預(yù)孵育液室溫孵育 5min,再入堿性預(yù)孵育液 30s。
3. 切片同時入 ATPase 孵育液,孵育 30-45min。
4. 1%氯化鈣洗三次,每次 1min。。
5. 入 Co 溶液 3min,蒸餾水充分洗 4-5 次,流水沖洗 2min。
6. 在上述過程中配制 ALP 硫化工作液,即取試劑(E)用蒸餾水稀釋 50 倍, 即為 ALP 硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液孵育 1-2min。
7. 流水洗 10min 后,入蒸餾水。
8. 切片經(jīng) 95%乙醇溶液及無水乙醇脫水。
9. 二甲苯透明,樹膠封片。
ATPase 染色液使用方法!
注意事項:
1. 切片入孵育液前后不可用水沖洗。
2. 若要顯示肌肉 ATPase 新鮮組織必須速凍后切片。
3. ALP 硫化液具有腐蝕性和刺激性氣味,應(yīng)小心操作。
4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。、
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ATPase 染色液使用方法!