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南京信帆生物:免疫組化之二步法介紹
更新時(shí)間:2016-04-26   點(diǎn)擊次數(shù):1362次

二步法:EnVision System

EnVision顯色系統(tǒng)是將二抗和酶通過(guò)一個(gè)多聚葡聚糖骨架聯(lián)接成一個(gè)多聚體(即 EnVision)直接放大信號(hào)40-50倍,把傳統(tǒng)的二抗、三抗分別孵育合為一次孵育。特點(diǎn):敏感、省時(shí)、方便、背景低(避免了內(nèi)源性生物素干擾)。

EnVision工作程序:

1) 脫蠟、水化組織切片。
2) 預(yù)處理組織切片(據(jù)一抗具體說(shuō)明而定)
3) 蒸餾水漂洗,置于TBS中。
4) 阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶(僅用于EnVisionTM/HRP)
5) 蒸餾水漂洗,置于TBS,10分鐘
6) 一抗孵育10-30分鐘
7) TBS漂洗10分鐘
8) EnVisionTM孵育10-30分鐘
9) TBS漂洗10分鐘
10) 色源底物溶液孵育10分鐘
11) 蒸餾水漂洗
12) 復(fù)染及封片

免疫染色方法
The basic principles of ICC
• 抗原抗體反應(yīng)
• 標(biāo)記化學(xué)反應(yīng)
• 呈色化學(xué)反應(yīng)
要求
待檢標(biāo)本形態(tài)結(jié)構(gòu)
和抗原性保存良好,
抗原不從原位擴(kuò)散
或丟失

Specimen preparation
取材新鮮,固定及時(shí),形態(tài)保存完好,抗原物質(zhì)的抗原性不丟失、不擴(kuò)散和被破壞
• Fixation
• Sample Type
Cryostat (frozen) sections
Paraffin Sections
Antigen Retrieval Techniques
• Intention: To facilitate the immunological reaction of antibodies with antigens (increase reactivity of the majority of antigens) .
Antibody Staining
• Primary antibody may be directly labeled
• labeled secondary antibody or more complex detection system.
• secondary antibody against the immunoglobulins of the primary antibody source
減少或消除非特異性染色的方法
• zui常見(jiàn)原因 蛋白吸附于高電荷的膠原和結(jié)締組織成分上

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